登錄注冊站(zhàn)點地圖
無内毒素質粒DNA小(xiǎo)量提取試劑盒采用SDS/堿裂解法釋放(fàng)質粒DNA,選擇性吸附質粒DNA去除絕大部分内毒素,高(gāo)鹽離子洗脫,進一(yī)步分相(xiàng)去除殘留的内毒素,異丙醇沉澱回收質粒DNA,可根據實驗需要決定DNA溶解體積。以平行處理4個(gè)樣品為(wèi)例,操作時間約90 min。
處理菌液體積與産量:1-5 ml LB菌液,每毫升LB菌液中可獲得5-10 μg高(gāo)拷貝質粒DNA。
質量與應用:内毒素含量低(dī)于6 EU/mg質粒DNA,以超螺旋構型為(wèi)主,無RNA與基因組DNA殘留,可用于細胞轉染。
附:鲎試劑凝膠法檢測内毒素
規格:0.1 ml 靈敏度:0.06 EU/ml 檢測下(xià)限:0.006 EU/支(購自(zì)廈門(mén)市(shì)鲎試劑實驗廠有限公司)
檢測組 |
37℃正立放(fàng)置1小(xiǎo)時,觀察凝膠形态 |
1. 陰性對照(zhào):100 μl無内毒素水(shuǐ) |
液态:材料與操作過程無内毒素污染 固态:材料或操作過程有内毒素污染,實驗數據無效 |
2. 陽性對照(zhào):用無内毒素水(shuǐ)配制标準品至0.25 λ(0.06 EU/ml),100 μl |
液态:鲎試劑失效,實驗數據無效 固态:鲎試劑有效,達到(dào)預期靈敏度 |
3. 幹擾測試:1-2 μg 質粒DNA與0.25 λ标準品混合,100 μl |
液态:鲎試劑失效或檢測樣品幹擾凝膠反應,實驗數據無效 固态:檢測樣品不影響凝膠反應 |
4. 檢測樣品:1-2 μg 質粒DNA加無内毒素水(shuǐ)至100 μl |
液态:内毒素含量<0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) 固态:内毒素含量>0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) |
通(tōng)常使用本試劑盒提取的質粒DNA檢測量為(wèi)1-4 μg,無凝集反應。