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無内毒素質粒DNA小(xiǎo)提中量試劑盒采用SDS/堿裂解法釋放(fàng)質粒DNA，選擇性吸附質粒DNA去除絕大部分内毒素，高(gāo)鹽離子洗脫，進一(yī)步分相(xiàng)去除殘留的内毒素，異丙醇沉澱回收質粒DNA，可根據實驗需要決定DNA溶解體積。以平行處理4個(gè)樣品為(wèi)例，操作時間約100 min。
處理菌液體積與産量：5-15 ml LB菌液，每毫升LB菌液中可獲得5-10 μg高(gāo)拷貝質粒DNA。
質量與應用：内毒素含量低(dī)于6 EU/mg質粒DNA，以超螺旋構型為(wèi)主，無RNA與基因組DNA殘留，可用于細胞轉染。
附:鲎試劑凝膠法檢測内毒素
規格：0.1 ml 靈敏度：0.06 EU/ml 檢測下(xià)限：0.006 EU/支（購自(zì)廈門(mén)市(shì)鲎試劑實驗廠有限公司）
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檢測組 |
37℃正立放(fàng)置1小(xiǎo)時，觀察凝膠形态 |
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1. 陰性對照(zhào)：100 μl無内毒素水(shuǐ) |
液态：材料與操作過程無内毒素污染 固态：材料或操作過程有内毒素污染，實驗數據無效 |
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2. 陽性對照(zhào)：用無内毒素水(shuǐ)配制标準品至0.25 λ(0.06 EU/ml)，100 μl |
液态：鲎試劑失效，實驗數據無效 固态：鲎試劑有效，達到(dào)預期靈敏度 |
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3. 幹擾測試：1-2 μg 質粒DNA與0.25 λ标準品混合，100 μl |
液态：鲎試劑失效或檢測樣品幹擾凝膠反應，實驗數據無效 固态：檢測樣品不影響凝膠反應 |
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4. 檢測樣品：1-2 μg 質粒DNA加無内毒素水(shuǐ)至100 μl |
液态：内毒素含量<0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) 固态：内毒素含量>0.006 EU/μg DNA (6 EU/mg DNA) |
通(tōng)常使用本試劑盒提取的質粒DNA檢測量為(wèi)1-4 μg，無凝集反應。
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