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質粒DNA小(xiǎo)量提取試劑盒采用SDS堿裂解法,結合矽膠膜選擇性吸附DNA的方法,适合從(cóng)1-4 ml細菌培養物(wù)中提取多(duō)至20 μg質粒DNA。純化的質粒DNA适合用于酶切、PCR、測序、轉化和轉染腫瘤細胞。
本試劑盒改進了裂解條件(jiàn)(Buffer P2),避免菌量極少時或者菌液過度老化時可能(néng)出現的單鏈質粒DNA;優化了中和環境 (Buffer P3),徹底去除遊離SDS,避免因SDS殘留導緻的酶切不完全或彌散、轉染效率低(dī)等情況。
使用不同公司的質粒DNA提取試劑盒從(cóng)同一(yī)份菌液中提取pUC19
M: DL2000, 1.5% agarose
1: 萊楓DK301 2-4: 其他公司同類産品
2:三種帶型從(cóng)下(xià)到(dào)上(shàng)分别為(wèi)超螺旋構型、線性和nicked構型。
pUC19是2686bp的小(xiǎo)型質粒,其超螺旋構型在1.5%瓊脂糖凝膠中電(diàn)泳遷移率接近2kb線性雙鏈DNA。
萊楓DK301明顯減少了對超螺旋質粒DNA的損傷。
使用DK301提取pTWIN1(7375BP),使用三種凝膠濃度電(diàn)泳鑒定
每張圖片左側為(wèi)DL15,000,右側為(wèi)提取的質粒DNA
1. 0.5%瓊脂糖凝膠,pTWIN1以超螺旋構型為(wèi)主;
2. 0.8%瓊脂糖凝膠,pTWIN1以超螺旋構型為(wèi)主;
3. 1.2%瓊脂糖凝膠,pTWIN1為(wèi)松散為(wèi)環狀構型,遷移率明顯大于線性構型和超螺旋構型;
使用相(xiàng)對較高(gāo)的瓊脂糖凝膠會(huì)促使質粒超螺旋構型松散為(wèi)環狀構型,此時質粒DNA為(wèi)封閉環或者帶切刻,電(diàn)泳遷移率小(xiǎo)于線性構型和超螺旋構型。